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lncRNA芯片

  • 簡介
  • 技術優勢
  • 數據庫
  • 實驗流程
  • 結果展示
  • 客戶案例
  • SCI成果
  •        長鏈非編碼RNA (LncRNA)是一類長度超過200nt的RNA,它們本身并不編碼蛋白,而是以RNA的形式在多種層面上(表觀遺傳調控、轉錄調控以及轉錄后調控等)調控基因的表達水平。近年來的研究表明:LncRNA廣泛參與各種生物學過程,LncRNA的異常表達與包括癌癥在內的多種疾病密切相關。通過LncRNA芯片,研究人員能夠快速高通量的獲得與特定生物學過程或者疾病相關的LncRNA的表達變化,從而為后續的LncRNA功能研究或生物標志物篩選提供極大的便利。

           Arraystar LncRNA芯片可同時檢測LncRNA和mRNA,迄今為止,國內客戶采用Arraystar LncRNA芯片已發表的SCI論文已超600篇,其中多篇發表在Cancer Cell,Mol Cell,Hepatology,Blood,EMBO等國際頂尖雜志上。

           現Arraystar lncRNA芯片已全面升級至人V.50,小鼠V4.0,大鼠V3.0,新增了lncRNA全長信息,并更新或增加了其它注釋。


    芯片特點

    ? 檢測lncRNA表達量靈敏度高、技術成熟,優于RNA-seq Learn more>>

    ? 收錄有完備的全長lncRNA*,覆蓋所有權威數據庫與重要文章中的lncRNA全長信息 Learn more>>
    ?
    注釋lncRNA更系統、更專業,包含基因組信息、表觀基因組信息*、序列完整性*、亞細胞定位**、miRNA識別位點 Learn more>>
    ?
    設計針對lncRNA不同轉錄本異構體的轉錄本特異性探針,對不同轉錄本檢測更準確、特異性更高 Learn more>>
    ?
    同時檢測lncRNA與mRNA,便于調控型lncRNA與編碼蛋白的mRNA之間共表達及關聯研究

    *適用于Human V5.0 ** 適用于Human V5.0 和 Mouse V4.0


    Aksomics(原康成生物)是Arraystar中國區唯一代理商,獨家為您提供Arraystar公司長鏈非編碼RNA芯片全程一站式技術服務。您只需要提供保存完好的組織或細胞標本,Aksomics的芯片技術服務人員就可為您完成全部實驗操作,并提供完整的實驗報告。同時,根據您的研究需要,Aksomics還提供各種深入數據挖掘服務。

    Arraystar公司LncRNA芯片產品列表

    服務 芯片 規格 描述
    Human LncRNA Microarray Service Human LncRNA Array V5.0 8x60K 39,317 LncRNAs and 21,174 mRNAs
    Mouse LncRNA Microarray Service Mouse LncRNA Array V4.0 8×60K 37,949 LncRNAs and 22,692 mRNAs
    Rat LncRNA Microarray Service Rat LncRNA Array V3.0 4×44K 10,333 LncRNAs and 28,287 mRNAs
  • 比RNA-Seq更適合于lncRNA表達譜檢測
    lncRNA一般表達水平低,且在低水平即可發揮功能,使用RNA-Seq檢測時常常被高豐度的RNA所遮蓋。以下是RNA-seq進行lncRNA表達研究的局限性:
       ? 由于lncRNAs豐度低和缺少全長注釋信息,導致lncRNAs的定量不準。
       ? RNA-Seq對剪接體覆蓋度差,通常缺少跨越剪接位點的reads,難以準確檢測lncRNA轉錄本異構體
       ? 分析缺少公共lncRNA數據庫,無法快速的系統性注釋和分析lncRNA
    >>Learn more


    完備、強化的全長lncRNA內容

         與具有詳盡注釋的蛋白編碼基因不同,lncRNAs常常缺乏注釋,信息分散且收集不全。Arraystar擁有高質量的轉錄組和lncRNA數據庫,對各種來源的lncRNA進行了全面收集,包括所有權威數據庫、高水平文章以及通過獨家自有收集流程所得到的lncRNA。

        

         Arraystar 人 lncRNA芯片 V5.0: FANTOM5 CAT (v1), GENECODE (v29), RefSeq (更新至 2018.11), BIGTranscriptome (v1), knownGene (更新至2018.11), LncRNAdb, LncRNAWiki, RNAdb, NRED, CLS FL, NONCODE (v5), MiTranscriptome (v2), 從超過 47 Tb RNA-seq數據中收集lncRNA. 共包含 39,317 lncRNAs,主要分為金標準lncRNA和可靠的lncRNA兩大類.  Learn more>>


        Arraystar小鼠 lncRNA芯片 V4.0: GENECODE(VM19), RefSeq(更新至2018.11), KnownGene(更新至 2018.11), GenBank.

        Arraystar 大鼠 lncRNA芯片 V3.0: Ensembl (92.rn6), RefSeq(更新至2019.1.1).

    lncRNAs的詳細注釋和功能分析
        一站式芯片結果包含系統、詳細和專業的lncRNA注釋,如基因組信息、表觀基因組信息、子類分析、轉錄本序列完整性、亞細胞定位、miRNA識別位點、物種保守性、組織/細胞特異性及短肽編碼潛力、相關的生物學過程以及疾病相關性,幫助您深入了解lncRNAs的生物功能和分子機制。 Learn more> >

    同時檢測lncRNA和蛋白編碼mRNA的表達,便于調控型lncRNA與編碼蛋白mRNA之間共表達及關聯研究 



        

  • Arraystar 人LncRNA 芯片V5.0

    探針總數 60,491
    探針長度 60 nt
    探針結合位點 轉錄本的外顯子或剪接位點處設計特異性探針
    探針特異性 轉錄本特異性
    蛋白編碼mRNAs 21,174
    LncRNAs 39,317 (8,393金標準LncRNAs 和 30,924可靠的 LncRNAs)
    mRNA來源 Refseq, UCSC, GENCODE, FANTOM5 CAT
    LncRNA來源 Arraystar LncRNA collection pipelines:
    lncRNAs from all major databases and literatures up to 2018. “Canonical” or “longest” priority assigned to the transcript for each lncRNA gene.
    External Databases (current in 2018):
    FANTOM5 CAT (v1), GENCODE (v29), RefSeq (Updated to 2018.11), BIGTranscriptome (v1), knownGene (Updated to 2018.11), LncRNAdb, LncRNAWiki, RNAdb, NRED, CLS FL, NONCODE (v5), MiTranscriptome (v2)
    Literatures:
    Scientific publications up to 2018
    芯片規格 8 × 60 K

    Arraystar 小鼠LncRNA 芯片V4.0

    探針總數 60,641
    探針長度 60 nt
    探針結合位點 轉錄本的外顯子或剪接位點處設計特異性探針
    探針特異性 轉錄本特異性
    蛋白編碼mRNAs 22,692
    LncRNAs 37,949
    mRNA來源 Refseq, Known Gene, GENCODE
    LncRNA來源 Arraystar LncRNA collection pipelines:
    lncRNAs from all major databases and literatures up to 2018. “Canonical” or “longest” priority assigned to the transcript for each lncRNA gene.
    External Databases (current in 2018):
    GENCODE(VM19), RefSeq, KnownGene, GenBank
    Literatures:
    Scientific publications up to 2018
    芯片規格 8 × 60 K

    Arraystar大鼠LncRNA芯片V3.0

    探針總數 38,620
    探針長度 60 nt
    探針結合位點 轉錄本的外顯子或剪接位點處設計特異性探針
    探針特異性 轉錄本特異性
    蛋白編碼mRNAs 28,287
    LncRNAs 10,333
    mRNA來源 Refseq, Ensembl
    LncRNA來源 Arraystar LncRNA collection pipelines:
    lncRNAs from all major databases and literatures up to 2018. “Canonical” or “longest” priority assigned to the transcript for each lncRNA gene.
    External Databases (current in 2018):
    Refseq, Ensembl
    Literatures:
    Scientific publications up to 2018
    芯片規格 4 × 44 K
  • 1.樣品總RNA抽提

          若實驗對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),勻漿后抽提RNA。
          若實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,完全吸去培養液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA。
    2. RNA質量檢測
           使用Nanodrop測定RNA在分光光度計260nm、280nm和230nm的吸收值,以計算濃度并評估純度。
           使用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度及完整性
    3. cDNA樣品合成和標記
    4.標記效率質量檢測
           使用Nanodrop檢測熒光標記效率,以保證后續芯片實驗結果的可靠性。
    5.芯片雜交
           在標準條件下將標記好的探針和高密度芯片進行雜交。
    6.圖像采集和數據分析
           使用GenePix 4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強度,并將實驗結果轉換成數字型數據保存,使用配套軟件對原始數據進行分析運算。
    7.提供實驗報告
           芯片掃描圖
           實驗方法中英文報告
           RNA質檢報告
           芯片數據結果報告,包括差異表達LncRNA列表,差異表達基因列表


    常規lncRNA芯片研究流程
    常規lncRNA芯片研究流程


  • 基本數據分析

    1.  差異LncRNA的篩選

           對于每個實驗組有三次及三次以上生物學重復的實驗設計,我們應用T檢驗篩選任意兩個實驗組之間差異表達的LncRNA,方差分析(ANOVA)則用于從三個以上實驗組篩選差異表達的LncRNA,并以鄰近(<100kb)mRNAs進行注釋。Aksomics除了提供常規的通過p值篩選的差異LncRNA,還提供通過   FDR篩選的差異LncRNA。與p值篩選相比,FDR篩選對多重篩選過程中的假陽性率進行控制,是一種更加嚴謹的篩選方法,更適合于生物學重復較多的臨床樣本。

           適用范圍:一般用于兩組或多組實驗狀態下的比較,建議每組實驗至少有3次生物學重復。

    差異LncRNA的篩選


    2.  差異表達的LncRNA的聚類圖

           為了全面而直觀地展示樣品之間的關系及基因表達差異情況,將表達基因做層次聚類分析。用挑選的基因的表達情況來計算樣品直接的相關性。一般來說,同一類樣品能通過聚類出現在同一個簇(Cluster)中,聚在同一個簇的基因可能具有類似的生物學功能。

           適用范圍:兩組或多組樣品的表達譜數據

    差異表達的LncRNA的聚類圖


    3.  差異LncRNA的鄰近基因分析

           很多LncRNA是通過調控鄰近發揮生物學功能,因此通過鄰近基因的分析可以為后續LncRNA的功能研究提供線索。Aksomics將差異LncRNAs數據與其臨近(< 100 kb)mRNAs的差異表達數據整合,以期提供LncRNAs的功能推斷。

           適用范圍:兩組或多組數據比較獲得的差異LncRNA

    1) GO分析

           Gene Ontology(簡稱GO)是基因功能國際標準分類體系。GO可分為分子功能(Molecular Function),生物過程(Biological Process)和細胞組成(Cellular Component)三個部分。Aksomics對位于差異LncRNA附近(< 100 kb),并且差異表達的蛋白編碼基因進行了GO分析。這一方面便于客戶從整體上了解差異LncRNA所涉及的GO條目,另一方面也為客戶挑選LncRNA提供了線索:客戶可以挑選與感興趣的GO條目相關的差異LncRNA進行后續研究。

    LncRNA Gene Ontology分析


    2) Pathway分析

           Aksomics對位于差異LncRNA附近(< 100 kb),并且差異表達的蛋白編碼基因進行了Pathway分析。這一方面便于客戶從整體上了解差異LncRNA所參與的信號通路,另一方面也為客戶挑選LncRNA提供了線索:客戶可以挑選與感興趣的信號通路有關的差異LncRNA進行后續研究。

    LncRNA Pathway分析


    4.  LncRNAs的子類分析

           適用范圍:兩組或多組數據比較獲得的差異LncRNA

    (1)差異antisence LncRNAs與相應mRNAs聯合分析

           在LncRNA中,研究得比較深入的是反義(Antisense) LncRNA,有超過30%的已注釋的人類轉錄本有相應的反義LncRNA。這些反義LncRNA通過多種機制在轉錄水平或轉錄后水平調控相應的正義(sense)mRNA,從而發揮生物學功能。如下圖中反義LncRNA誘導染色質和DNA的表觀遺傳改變,從而影響相應的正義mRNA的表達。Aksomics將差異antisense LncRNAs與相應的sense mRNAs信息進行整合,以推斷LncRNAs的功能.

     差異antisence LncRNAs與相應mRNAs聯合分析

    *圖釋:反義LncRNA誘導染色質和DNA的表觀遺傳改變,從而影響相應的正義mRNA的表達。

     差異antisence LncRNAs與相應mRNAs聯合分析圖2


    (2)差異Enhancer LncRNAs與相應mRNAs聯合分析

           LncRNA可以發揮類似增強子的功能,增強鄰近蛋白質編碼基因的表達,從而在發育和分化等過程中發揮關鍵作用。Aksomics對?rom UA等人在人類細胞系中發現的3千多條具有增強子功能的LncRNA 進行了詳細的注釋,并將差異的Enhancer LncRNAs與相應的mRNAs(<300kb)進行了整合,以幫助客戶推斷這些LncRNAs的功能。

    差異Enhancer LncRNAs與相應mRNAs聯合分析

    *圖釋:LncRNA作為增強子,增強鄰近蛋白質編碼基因表達水平;下圖:經siRNA敲除ncRNA后,鄰近蛋白質編碼基因表達水平下降

    差異Enhancer LncRNAs與相應mRNAs聯合分析圖2


    (3)差異LincRNAs與相應mRNAs聯合分析

           lincRNAs是目前研究的熱點之一。Aksomics根據Rinn等構建的lincRNAs數據庫,將芯片中符合標準的差異LncRNA挑選出來與相應mRNA(< 300 kb)進行聯合分析,以推斷lincRNA功能。

    差異LincRNAs與相應mRNAs聯合分析


    高級數據分析

    1. CNC(coding-noncoding gene co-expression)分析

           CNC分析是一種通過LncRNA和mRNA共表達數據,將LncRNA與mRNA聯系起來的分析方法。通過CNC分析可以發現與某個LncRNA具有相同表達模式的mRNA,通過這些mRNA的功能,可以將LncRNA與特定信號通路或疾病狀況聯系起來,從而便于預測LncRNA的功能,并揭示其作用機制。

           適用范圍:芯片數量≥6張

           AksomicsCNC分析結果展示,下圖數據來源于Aksomics客戶已發表的文獻(Hepatology,影響因子:12.003):

     CNC(coding-noncoding gene co-expression)分析

    *圖釋:LncRNA-HEIH在HCC中的共表達網絡。黃色的節點代表LncRNA,綠顏色的節點代表與腫瘤生長和藥物耐受相關的蛋白編碼基因,紫色節點代表功能未知的蛋白編碼基因。


    2. 生物標志物分析

           Aksomics還為客戶提供包括課題設計到數據分析在內的一站式biomarker分析,以常見的篩選預后biomarker為例,我們首先通過Cox回歸模型篩選預后相關的LncRNA,然后通過Logistic regression,Nearest Template Prediction (NTP)等多種統計學方法構建預測模型,然后從中挑選出效果最理想的預測模型用于后續分析。無論是LncRNA的篩選,還是預測模型的建立,Aksomcis都通過嚴謹和科學的分析為客戶發表文章提供幫助。





  • 1.P53響應的lncRNA GUARDIN參與維護基因組穩定的功能機制研究(GUARDIN is a p53-responsive long non-coding RNA that is essential for genomic stability. Nature Cell Biology, 2018)IF:20.06

    作者應用Arraystar Human LncRNA Array對帶有WT p53表達系統以及沒有p53表達的H1299人肺腺癌細胞的lncRNA表達譜進行了研究,研究篩選出了一個受p53調控的lncRNA GUARDIN。qPCR驗證與芯片結果一致,生信分析發現GUARDIN有三個異構體,其中最長的亞型在p53誘導時含量最豐富。接下來作者通過過表達/敲除p53、qPCR、WB、免疫沉淀等實驗驗證了GUARDIN是p53響應的lncRNA。在HTC116細胞中,敲除GUARDIN,細胞數目、細胞活力、克隆形成及異移植都明顯下降,表明GUARDIN是細胞存活和增殖所必需的。機制研究表明,GUARDIN可以結合miR-23a且能調控miR-23a的靶基因TRF2的表達。進一步研究發現GUARDIN可以作為分子支架介導BRCA1與BARD1的相互作用來調控BRCA1的表達。然后作者通過DNA損傷彗星實驗發現,GUARDIN敲除后,DNA損傷加劇等,表明了GUARDIN對基因組穩定性的作用,而且TRF2和BRCA1共同過表達可以消除GUARDIN下調引起的DNA損傷。上述實驗表明GUARDIN可以通過調控TRF2和BRCA1的表達促進基因組穩定性。

    2.lncRNA GClnc1作為胃癌預后生物標志物及其調控胃癌發生發展的功能機制研究(LncRNA GClnc1 Promotes Gastric Carcinogenesis and May Act as a Modular Scaffold of WDR5 and KAT2A Complexes to Specify the Histone Modification Pattern. Cancer Discovery, 2016)IF: 19.783

    該研究首先借助Arraystar lncRNA芯片檢測了10個胃癌患者的癌組織和癌旁組織中lncRNA的表達情況。之后作者利用嚴格的篩選條件(P值<0.01, Foldchange>2和原始信號值>1500)從差異表達上調的lncRNA中選取了8個指標進行后續的大樣本qPCR驗證(n=165),以及臨床相關性分析,發現lncRNA GClnc1的異常表達和胃癌的不良預后高度相關,預示它可以作為胃癌預后診斷的潛在biomarker。接著作者對于lncRNA GClnc1是如何調控胃癌的發生和發展進行了深入的功能和機制探究,首先通過GOF/LOF實驗證明lncRNA GClnc1可以促進胃癌細胞的增殖、侵襲和轉移,然后通過RNA-seq、CNC、ChIP以及ChIRP等細胞生物學實驗和生物信息學分析來挖掘lncRNA GClnc1的調控靶點以及相應的調控機制。結果表明lncRNA GClnc1可以作為支架分子(scaffold)錨定在鄰近基因SOD2的啟動子區域,然后招募組蛋白修飾酶WDR5和KAT2A來順式(cis)調控基因SOD2的表達,從而促進了胃癌的發生和發展。


  • →  H. pylori infection alters repair of DNA double-strand breaks via SNHG17 The Journal of Clinical Investigation . 2020

    →  Long noncoding RNA HCP5 participates in premature ovarian insufficiency by transcriptionally regulating MSH5 and DNA damage repair via YB1 . Nucleic Acids Research . 2020

    →  lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1 axis regulates tumorigenesis and metastasis of lung cancer by activating Wnt/β-catenin signaling . Molecular Cancer . 2020

    →  Roles of DANCR/microRNA-518a-3p/MDMA ceRNA network in the growth and malignant behaviors of colon cancer cells . BMC Cancer . 2020

    →  Long non‐coding RNA mediates stroke‐induced neurogenesis . STEM CELLS . 2020

    →  Functional Implications of Cathelicidin Antimicrobial Protein in Breast Cancer and Tumor-Associated Macrophage Microenvironment . Biomolecules . 2020

    → LncRNA Oprm1 overexpression attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury by increasing endogenous hydrogen sulfide via Oprm1/miR-30b-5p/CSE axis . Life Sciences . 2020

    →  MicroRNA‐127‐5p impairs function of granulosa cells via HMGB2 gene in premature ovarian insufficiency . Journal of Cellular Physiology . 2020

    →  Identification and analysis of key lncRNAs in malignant-transformed BEAS-2B cells induced with coal tar pitch by microarray analysis . Environmental Toxicology and Pharmacology . 2020

    →  A comprehensive evaluation of differentially expressed mRNAs and lncRNAs in cystitis glandularis with gene ontology, KEGG pathway, and ceRNA network analysis . Translational Andrology and Urology . 2020

    →  Long noncoding RNA CCAT1 inhibits miR‐613 to promote nonalcoholic fatty liver disease via increasing LXRα transcription . Journal of Cellular Physiology . 2020

    →  Inflammation and DNA methylation coregulate the CtBP-PCAF-c-MYC transcriptional complex to activate the expression of a long non-coding RNA CASC2 in acute pancreatitis . Int J Biol Sci . 2020

    →  The Long Noncoding RNA ZFAS1 Potentiates the Development of Hepatocellular Carcinoma via the microRNA-624/MDK/ERK/JNK/P38 Signaling Pathway . OncoTargets and Therapy . 2020

    → A long noncoding RNA cluster-based genomic locus maintains proper development and visual function . Nucleic Acids Research . 2019

    →  LncRNA PCAT1 activates AKT and NF-κB signaling in castration-resistant prostate cancer by regulating the PHLPP/FKBP51/IKKα complex . Nucleic acids research . 2019

    →  m 6 A-induced lncRNA RP11 triggers the dissemination of colorectal cancer cells via upregulation of Zeb1 . Molecular cancer . 2019

    →  Long non-coding RNA GBCDRlnc1 induces chemoresistance of gallbladder cancer cells by activating autophagy . Molecular cancer . 2019

    →  NKILA lncRNA promotes tumor immune evasion by sensitizing T cells to activation-induced cell death . Nature immunology . 2018

    →  Long Non-coding RNA GMAN, Upregulated in Gastric Cancer Tissues, is Associated with Metastasis in Patients and Promotes Translation of Ephrin A1 by Competitively Binding GMAN-AS . Gastroenterology . 2018

    →  GUARDIN is a p53-responsive long non-coding RNA that is essential for genomic stability . Nature Cell Biology . 2018

    →  Long noncoding RNA lnc-TSI inhibits renal fibrogenesis by negatively regulating the TGF-β/Smad3 pathway . Science translational medicine . 2018

    →  A 3-LncRNA Risk Scoring System for Prognosis of Adult Acute Myeloid Leukemia . Blood . 2018

    → GUARDIN is a p53-responsive long non-coding RNA that is essential for genomic stability. Nature Cell Biology. 2018


    更多SCI成果詳見>>

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